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【制备方法】 本品系采用免疫学技术将H5N1亚型病毒和H9N2亚型病毒多次免疫健康蛋鸡，收集鸡蛋，分离卵黄，用水稀释法结合硫酸铵盐析法，在保证抗体生化结构完整以及生物活性良好存在的前提下，彻底去除垂直传播病原，结合化学灭活、高速离心、超滤等现代生物技术，浓缩精制而成的二价卵黄抗体。
【物理性状】 本品为微黄色粉或白色液体。
【作用与用途】 主要预防及治疗家禽流行性感冒，尤其对H5N1亚型病毒和抗H9N2亚型病毒引起的重度感染、后期衰竭有非常独特的预防及治疗效果。
【用法用量】 肌内注射，250 毫升本品可治疗禽流感病鸡250只，预防时可用于500只。病情严重需按兽医要求加量，若有细菌混合感染可配合抗生素同时使用。
【贮藏与有效期】 常温下可保存6～12个月，在2℃～8℃条件下冷藏可保存18个月。
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（十三）鸭病毒性肝炎精制卵黄抗体（AV 2111？30株）（）
【主要成分】 本品主要含鸭病毒性肝炎抗体，中和抗体效价≥1 ∶ 256。
【物理性状】 本品为略带棕色或淡黄色透明液体，放置48小时后瓶底有少许微细白色沉淀。
【作用与用途】 用于治疗和紧急预防鸭病毒性肝炎。
【用法与用量】 皮下或肌内注射均可。紧急预防时1日龄雏鸭每只0。5毫升，2～5日龄雏鸭每只0。5～0。8毫升。治疗感染发病的雏鸭，每只1～1。5毫升。
【不良反应】 无可见不良反应。
【注意事项】 ①本品注射后，被动免疫保护期为5～7 天。②本品口服无效。③本品可连续应用2～3次。④本品应用后对鸭病毒性肝炎弱毒疫苗接种有干扰作用，7天内不宜接种鸭病毒性肝炎弱毒疫苗。⑤本品可与抗菌药物混合后一次注射。⑥本品久置后瓶底有微量白色沉淀，对疗效无影响。
【贮藏与有效期】 在2℃～8℃条件下遮光保存，有效期为18个月。
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（十四）非特异性卵黄抗体干粉（）
【制备方法】 本品是用不同抗原免疫产卵母鸡后，在其体内产生相应抗体并转移积累于卵黄中。采用沉淀法，并经喷雾干燥工艺制备成卵黄抗体干粉，再与益生菌组合而成的固体制剂。本产品能充分发挥免疫球蛋白的非特异性免疫及相应生理促进功能，从而起到对病原体的协同免疫作用，达到预防和治疗感染性疾病的功效。本品无污染、无耐药性、无残留，药效持续时间长，可有效代替抗生素。有益菌大于1亿个/克，非特异性卵黄抗体不低于1 ∶ 320。
【作用与用途】 在临床上已广泛用于鸡传染性法氏囊病、新城疫、传染性鼻炎、心包炎、大肠杆菌病、小鹅瘟、鸭传染性浆膜炎、输卵管炎等以及慢性呼吸道疾病的紧急治疗和预防，效果显著。可增强家禽抗病能力，减少家禽疫病的发生。
【用法与用量】 本品100克混合600千克饲料，让禽自由采食，连用3～6天。饮水时用本品100克混于1 000升水中，供禽自由饮用，连用3～6天。疫情高发期可倍量使用。
【不良反应】 无可见不良反应。
【贮藏与有效期】 在2℃～8℃条件下遮光保存，有效期为18个月。
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一、禽流感病毒5亚型反转录？聚合酶链式反应检测试剂盒（）
【主要成分】 变性液1瓶（6毫升），酚、氯仿、异戊醇混合液1瓶（6毫升），异丙醇1瓶（9毫升），75％乙醇2瓶（10毫升/瓶），焦碳酸二乙酯（DEPC）1管（500微升），2摩/升醋酸钠溶液（pH值4）1管（700微升），阳性对照1管（100微升），阴性对照1管（100微升），反转录？聚合酶链式反应体系22管（22。5微升/管），6倍上样缓冲液1管（100微升），扩增对照1管（30微升）。
【作用与用途】 适用于可能感染H5亚型禽流感病毒的咽喉拭子、泄殖腔拭子、组织、鸡胚尿囊液以及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒RNA。
【用法与判定】 ①取1。5毫升焦碳酸二乙酯处理过的离心管，加入待检样品100微升，加300微升变性液，继续加入30微升2摩/升醋酸钠（pH值4）。反复颠倒离心管4～5次，以混合均匀。②加入酚、氯仿、异戊醇混合液300微升，反复颠倒离心管3～5次，再摇晃10秒，在冰上静置15分钟。③在4℃条件下，以12 000转/分离心20分钟，吸取上清液置于另一个离心管中。④加入等体积的异丙醇，在…20℃条件下静置10～15分钟，沉淀RNA。⑤在4℃条件下，以12 000转/分离心10分钟。弃去上清液，加入75％冰乙醇，轻轻地反复颠倒离心管3～5次。⑥在4℃条件下，以12 000转/分离心5分钟，弃去上清液，用滤纸吸干管壁上的余液，真空抽干或者置于37℃条件下烘干5～20分钟。⑦加入10毫升焦碳酸二乙酯溶解RNA。⑧取2。5微升RNA转移到反转录？聚合酶链式反应体系管中。⑨置于PCR仪中，循环参数为45℃反转录45分钟，94℃预变性2分钟，94℃扩增30秒、52℃扩增45秒、68℃扩增45秒，共35个循环，最后68℃延伸8分钟。⑩取5微升聚合酶链式反应产物，混合1微升上样缓冲液，1％琼脂糖凝胶电泳分析产物，以DNA分子量Marker为参考。
结果判定，同时出现372bp和229bp大小的扩增片段时，判定为H5亚型禽流感病毒阳性，只出现229bp片段判定为其他亚型A型流感病毒阳性，只出现372bp片段判定为H5亚型疑似，无条带者判定为阴性。
【注意事项】 ①本试剂盒的RNA提取液应置于2℃～8℃条件下存放，反转录？聚合酶链式反应体系置应置于…20℃以下条件下存放，且尽量不要反复冻融。②反转录？聚合酶链式反应体系，用前要先在冰上彻底溶化，并瞬时离心将液体甩至管底。③病料的处理很重要，现地采集的病料应先进行研磨，再按照每克重量加入1毫升磷酸盐缓冲液（PBS），混匀后按10｛L…End｝ …1
～10｛L…End｝ …2
比例稀释后用于RNA的提取。棉拭子病料直接加入1毫升磷酸盐缓冲液，混合后取溶液用于RNA的提取，不需要稀释。④RNA的提取直接会影响到反转录？聚合酶链式反应的检查结果，需要特别注意提取过程的操作。⑤注意废弃物的无害化处理，可疑待检样品及其接触过的器材要消毒灭菌，防止实验室散毒；含有或沾有溴化乙锭（EB）的物品需要高温处理。注意防止操作过程中的环境污染，有条件的情况下可以使用独立房间分别进行各环节的操作，无条件时则应尽可能划分不同功能的工作区，并且电泳时要采用单独的移液器。⑥剩余的试剂及空瓶不能随意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。
【贮藏与有效期】 RNA提取试液应置于2℃～8℃条件下保存，反转录？聚合酶链式反应体系置于…20℃以下条件下保存，有效期均为6个月。
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二、禽流感病毒5亚型血凝抑制试验抗原与阴性、阳性血清（）
【主要成分】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒，血凝抑制效价≥7log2。阳性血清为SPF鸡感染禽流感病毒H5亚型制备的高免血清，血凝抑制效价≥7log2。阴性血清为无特定病原鸡血清。
【物理性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块，阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于血凝抑制试验检测禽流感病毒H5亚型抗体。
【用法】
准备的材料：96孔V形（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯。
pH值7。2的0。01摩/升磷酸盐缓冲液的配制：①配制25倍磷酸盐缓冲液。称量2。74克磷酸氢二钠和0。79克磷酸二氢钠，加蒸馏水至100毫升。②配制1倍磷酸盐缓冲液。量取40毫升25倍磷酸盐缓冲液，加入8。5克氯化钠，加蒸馏水至1 000毫升，用氢氧化钠或盐酸调pH值至7。2；69千帕高压蒸汽灭菌15分钟或用微孔滤膜过滤除菌。
磷酸盐缓冲液一经使用，于2℃～8℃条件下保存不超过3周。
阿氏（Alsevers）液的配制：称量葡萄糖2。05克、柠檬酸钠0。8克、柠檬酸0。055克、氯化钠0。42克，加蒸馏水至100毫升，加热溶解后调pH值至6。1，69千帕高压蒸汽灭菌15分钟，置于2℃～8℃条件下保存备用。
1％鸡红细胞悬液的配制：采集2～3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血液，与等体积阿氏液混合，用pH值7。2的0。01摩/升磷酸盐缓冲液洗涤3次，每次洗涤后均以3 000转/分离心5分钟，之后用磷酸盐缓冲液配成1％红细胞悬液，置于2℃～8℃条件下保存备用。
抗原溶解：冻干的抗原和血清均按瓶签上标注的量，用磷酸盐缓冲液溶解。
【血凝试验及结果判定】 在 V 形微量反应板中，每孔加0。025毫升磷酸盐缓冲液。第一孔加0。025毫升抗原，反复抽打3～5次混匀。从第一孔吸取0。025毫升抗原加入第二孔，混匀后吸取0。025毫升加入第三孔，如此进行对倍稀释至第十一孔，从第十一孔吸取0。025毫升弃去。每孔加0。025毫升磷酸盐缓冲液和0。025毫升1％鸡红细胞悬液。将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20℃～25℃）下静置20～30分钟或在2℃～8℃条件下静置45～60分钟。在对照孔红细胞显著呈纽扣状时判定结果。结果判定时将反应板倾斜60°，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100％凝集）的最高稀释倍数为血凝效价。
【血凝抑制试验及结果判定】 根据血凝试验测定的效价，计算配制4个血凝单位（4HAU）抗原。血凝效价除以4即为含4个血凝单位抗原的稀释倍数。例如，血凝效价为1 ∶ 256，则4个血凝单位抗原的稀释倍数应是1 ∶ 64（256除以4）。第一至第十一孔加入0。025毫升磷酸盐缓冲液，第十二孔加入0。05毫升磷酸盐缓冲液。第一孔加入0。025毫升血清，充分混匀后吸0。025毫升于第二孔，依次倍比稀释至第十孔，从第十孔吸取0。025 毫升弃去。第一至第十一孔均加入0。025毫升4HAU抗原，在室温（20℃～25℃）下静置30分钟或在2℃～8℃条件下静置50分钟。每孔加入0。025 毫升 1％鸡红细胞悬液，振荡混匀，在室温（20℃～25℃）下静置20～30分钟或在2℃～8℃条件下静置45～60分钟，对照红细胞将呈明显的纽扣状沉于孔底。
以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的血凝抑制效价。当阳性对照血清的血凝抑制效价与已知效价误差不超过1个滴度、阴性对照血清效价不高于21og2 时，试验方可成立。被检血清血凝抑制效价≤31og2判为阴性；=41og2判为可疑（可疑样品应重检，重检效价≥41og2 判为阳性，≤31og2 判为阴性）；≥51og2判为阳性。
【注意事项】 ①影响血凝和血凝抑制试验的因素很多，应严格控制试验条件。每加一份试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。②准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。③用pH值7～7。2的磷酸盐缓冲液作为稀释液。④抗原和阴性、阳性血清若有污染应废弃。⑤�