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实验室手册-第4章

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4、不要用化学药品如汽油、挥发性油洗涤该机,或用水冲洗之。
5、厉行节约,不需要开空调机就不要使用。人离开前,切记关机。
三、 RP…63OD微波炉使用注意事项
1、 微波炉内空载时,请勿使用。
2、 微波炉门未关前或门关闭不良,请勿打开开关。
3、 金属容器或物品切忌不要放入微波炉内,以防发生电火花损坏微波炉和容器。
4、 不要用纸、布、毛制品包物品放入微波炉,以免损坏或引起意外事故。
5、 微波炉使用后,可放入一杯水,以吸收余热。
6、 保持微波炉内外壁、门、托盘的清洁,但切记在操作后,马上用凉水冲洗,以防破裂;微波炉使用后,应抹干内壁的水汽。
7、 微波炉有故障时,切勿使用,应送专职人员检修。
8、 功能选择:
Power  level Percentage/Output
High   100%/650w
M。High     70%/450w
Medium   50%/320w
Defrost   30%/200w
Low    15%/90w
第十节 KZBZ…40自动颗粒制冰机
1、 该机由电子部分、制冰部分和颗粒冰推进部分组成,按程序工作。每小时可制冰5公斤,蓄冰量可达20公斤,24小时连续制冰,
2、 本机为水冷散热型机组,要求通风良好,离墙和其他物之间距离应大于30厘米。
3、 开机前切记检查水源是否接通,机器背面左下侧的进口用橡胶管套紧并接自来水,接好扎牢后方可打开水源(注意:进水压应在1。4…4。0kg/cm2)。
4、 开启水源后,吸需打开正面的电源开关,机器就会按程序工作。若水源停止供水时,应关闭机器。
5、 在制冰过程中应关闭蓄冰室门,整机在开机15分钟后方可出冰;1小时后取冰,这时的冰温度最低(…8),硬度最强。
6、 机器背面右侧面有个放水口,接上一根30cm长的橡胶管引致一只存水盆收集制冷过程中的水滴和融化的冰水。
7、 当蓄冰室冰满后通过电子控制自动停机,当驱除部分冰后,机器又自动工作制冰。
8、 整机应保持干净,机器上面不应放杂物,严禁通电时搬动。
9、 关机后,应关闭水源。当较长时间不使用时,应清理蓄冰室等部件。
第十一节 其它仪器设备
一、 LRH…150B型生化培养箱使用说明书和注意事项
1、 电源开关拨至“开”位置,电源指示灯亮,机器开始工作。
2、 温度调整:
(1) 将温度显示开关拨至“开”,数显表电源接通。
(2) 将“整定”、“测量”共用开关拨至“整定”位置,然后旋转温度刻度盘,直到数显表显示出所需要的温度值为止。
3、 将共用开关拨至“测量”档,
此时数显表显示温度仅仅是箱内实际温度,但此时的温度将随机器的工作状态而改变,当机器达到平衡状态,即既不加热,也不制冷时,则数显表所显示数值即为所需温度值。
电源接通后,调节好所需的温度,这时不能随便将控温旋钮来回多次旋转,以免压缩机启动频繁,造成压缩机出现过载现象,影响压缩机寿命。
4、若开机后,经过一段时间,加热、制冷指示灯均不亮,则表示箱内温度达到
平衡,等于所需温度…补偿,故加热指示灯出现闪烁现象是正常情况,但要防止两灯同时亮,否则表明机器出现故障,须即使检查、理。
4、 当使用温度较低时,应定期倒掉位箱内底部接水盘内的积水。
5、 箱内无需照明时,应将面板车上的照明开关置于“关”位置。
6、 严禁用手或其它硬件碰撞、拉动箱内的控温探头,以免造成失控制。
7、 若机器运转出现故障如控温失灵,不加热或不制冷,须先切断电源,分别检查保险丝是否完好,再检查相应部分。
二、 YXQ。G01。280手提式高压蒸汽消毒使用说明
1、 首次使用必须了解消毒器内物品如何包扎——堆放——(加水)——密封——加热—— 消毒——干燥——冷却的方法,最好是在有关
人员指导下进行操作。
2 、始终应保持消毒器内有足够的水量(约2。5公斤)
3 、在消毒开始时一定要将汽阀开放,使消毒桶内的空气逸去,否则 会得不到良好的消毒效果。
4 、溶液应灌装在硬质耐热的玻璃容器内,不要灌装得太满,一般灌至容器的1/2~3/4容积。
5 、不允许将不同类型不同消毒要求的物品放在一起消毒。
6 、每周将安全阀开放数次,这样可以保证安全阀处于良好的灵活状态。
7 、压力表使用日久后会使读不准确,应检修或换上新表。
8 、平时注意消毒器的清洁干燥,可以延长使用年限。
9 、消毒过程中操作者最好不要离开现场,若要离开,一定要交待他人代为看管。
10 、不同物品消毒所需时间、温度与压力:
消毒物类      消毒所需保温       蒸汽压力       表 压     饱和蒸汽相 
              时间(分钟)      (公斤/厘米)(碳/英寸)   对温度( )   
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橡胶类        15                1。05 ?1。1        15?16         121    
敷料类      30?45               1。05?1。4         15?20       121?126     
器皿类        15               1。05?1。4          15?20       121?126
器械类        10               1。05?1。4          15?20       121?126  
瓶装溶液类  20?40               1。00?1。4          15?20      121?126  
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三、 其实各类仪器使用前请详细阅读使用说明书,这里不在一一介绍。




                第三部分  实验室常规试验程序
第一章 组织培养及常用溶液的配制
第一节 鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸭胚成纤维细胞(DEF)培养
一、 材料
9?10日龄鸡胚  13?14日龄鸭胚   眼科剪、 镊、外科镊 、巴氏吸管 、蛋架、灭菌平皿   25ml小三角瓶  Hanks'液  0。25%胰酶液  Versene液  灭菌纱布、玻璃漏斗、0。1% 结晶柠檬酸(0。1M)或0。4%台盼兰;血球计数板、60ML培养瓶或60ML培养皿、灭菌盖玻片、营养液。        
二 方法(CEF为例)
鸡胚 理:取9?10日龄鸡胚直  于蛋架,在气室部用于5%碘酊棉 消毒,再用洒精棉 脱色,用外科镊击破蛋壳用眼科镊取出胚体放于平皿内,去喙瓜眼和内脏,用Hank's液洗两次,用弯头眼科剪剪胚剪成1…2mm的碎块,加Hank’s液20ml;略加摇振,静置使组织块下沉,将混有红血球及碎片的上悬液吸去,重复洗2—3次,直至上悬液不混浊为止。
2、 消化:将0。25%胰蛋白酶溶液用5、6%NaHCO2滴定至PH7、6—7、8,加热至37度,按组织块量3—5倍加于装有鸡胚碎块的三角瓶中,每个鸡胚约需胰酶5ml,30分钟取出,静置1—2分钟,吸去胰液,再加HanK’s液20ml,轻轻摇动后吸去,如此反复两三次,目的是洗去残余的胰酶。第三次加入营养液,每胚3ml左右,用粗口吸管吹吸数次,使细胞脱落分散。静置1—2分钟,候组织下沉后,细心将细胞悬液吸出,另置一只25ml三角瓶,如此反复数次,使细胞尽量自组织块脱落,将多次取得的悬液合并一处,纱布过滤悬液。必须注意每次吹吸一般6—7次为宜 ,太多则细胞受损,消化时间要灵活掌握,不足细胞不易掊落,太久则细胞破碎。
在消化过程中,摇动时组织不易下沉即立即停止,消化后如组织粘连如涕,证明消化过度。
二、 细胞计数:
取细胞悬液0。1(100ul)置盛有0。9ml10。4%台盼蓝的试管中混合;用血球计数板计数。
计算方法:    
                    4大方格细胞数
每ml细胞数=——————————————X10(5)
                      4
               5中格细胞数
或每ml细胞数=——————————X10(4)
三:接种
以营养液配成每ml10(6)细胞(最终稀释度)接种链霉素瓶(1ml)、60ml瓶(8—10ml),100mm  dish(10ml),60mm  dish(4ml),37度孵育48小进后形成单层,接种病毒或作次代培养。
四、CEF单层可供作病毒TCID50LD50等指数的测定;空斑计数病毒中和试验等。

第二节 溶液配方
一、PBS

1、无钙镁PBS
                  50X                   (Less NaCl)
1000ml                双蒸水
10g                   KCl
  60g                KH2PO4
                         60g                Na2HPO4(Na2PO4。12H2O 151g)
溶后分装20ml管,…20 保存
20ml    PBS     base   50X
8g      NaCl
0。3ml    0。5%酚红
980ml    双蒸水              15P    11分钟
2、NaCl       8。0g
   KCl        0。2g
   CaCl2      0。1g
   MgCl2      0。1g
   Na2HPO4   1。15g(Na2HPO4。12H2O ;   2。92g)
   KH2PO4     0。2g
双蒸水至100ml; 过滤除菌,50保存。
3、 分别配制A、B、C原液
A液: NaCl         80。0g
       KCl          2。0g
       KH2PO4      2。0g
       Na2HPO4。2H2O      14。4g(Na2HPO4。12H2O   29。0g)
 双蒸水至800ml
B液:CaCL2      0。5g
      双蒸水     500ml
C液:MgCl2      0。5g
      双蒸水     500ml 
以上三液分别 10P10’高压蒸气灭菌,冷却后
A                   80V
B                   100V
C                   100V
H2O                720V
无菌混合
注意:
   各化学药品的结晶水重量是否扣除!
二Hank’s  Solution
   分别配制 A、B原液
A液:NaCL        160。0
      KCl  8。0   加入800ml双蒸水     
MgSO4。7H2O
MgCl2。6H2O   2。0
      CaCl2       2。8(溶于10ml双蒸水)
双蒸水加至 1000ml                                  
B液:Na2HPO4。12H2O      3。04g
      KH2PO4。2H2O        1。2g      800ml双蒸水
      Glucose               20。0g
0。4%酚红液100ml
双蒸水至1000ml,2ml氯仿防腐,4保存。
A    1V   10P   10min   灭菌
B  1V  10P  10min  灭菌
双蒸水  18V  10P  10min  灭菌
1…4保存,可用1个月。
用5。6%NaHCO3(10P  10min  灭菌)或3。5%,调PH至7。2—7。6(加NaHCO3后须立即使用)。
三、0。4%酚红液。         
 称酚红0。4g→置乳钵滴加0。1N  NaOH(总量11。2g/ml)并不断研磨→所有颗粒全部溶解→100ml量瓶,将已溶后的吸入,用双蒸水洗钵数次,倒入→加双蒸水至100ml摇匀,4℃保存。

四、 Versene液
乙二胺四乙酸二钠(Versene)  0。2克
NaCL                           8。0克
KCL                            0。2克
NaH2PO4                        1。15克(NaH2PO412H2O=2。9)
KH2PO4                          0。2克
双蒸水至1000ml;10P’;10’灭菌;4℃保存;可用3个月。
五、 胰酶液Tryptase
一般配成0。25%
取0。25克溶于100mlHank’s滤过除菌;分装小瓶。…20℃保存。用前融化加入青链霉素100单
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